文献中心
当飞利肝宁胶囊治疗乙型肝炎的药理学研究 <三> ：当飞利肝宁胶囊对实验性大鼠肝纤维化的影响
杭州市第六人民医院
施军平 过建春
摘 要：目的：观察当飞利肝宁胶囊对实验性大鼠肝纤维化的影响。方法：利用40%四氯化碳花生油给予大鼠肝皮下注射诱导肝纤维化。用当飞利肝宁胶囊进行干预，并以复方鳖甲软肝片作阳性对照，分别在三周末及六周末取血，测量肝功能、肝纤维化相关指标，并取肝脏通过光镜观察肝组织病理变化。结果：当飞利肝宁胶囊组和复方鳖甲软肝片组大鼠在三周、六周肝功能均有明显改善，但当飞利肝宁组较复方鳖甲软肝片更为明显（P<0.05）；血清HA、PC-III、LN值明显低于模型组，有显著性差异（P<0.05）；两组肝纤维化程度均好于模型组（P<0.05，P<0.01）。提示：当飞利肝宁胶囊和复方鳖甲软肝片有良好的抗肝纤维化效果，其中当飞利肝宁胶囊有显著改善肝功能、降低肝纤维化相关指标的作用。
主题词：肝硬化/中医药疗法 复方（中药）/治疗应用 大鼠
当飞利肝宁胶囊的主要成分为当药和水飞蓟，具有清热解毒，利胆化湿作用。近年来，国内陆续有应用该药治疗各种急、慢性肝病的报道，但对其抗肝纤维化作用及其机制进行研究不多。为此，凯发k8国际进行当飞利肝宁胶囊对实验性大鼠肝纤维化影响的研究，并与复方鳖甲软肝片作比较。现报道如下：
1 实验材料与方法
1.1 药物 当飞利肝宁胶囊原粉，由凯发·k8(国际) - 官方网站生产，批号：030215，每胶囊含生药为1.0g；复方鳖甲软肝片，由中国人民解放军三0二医院研制，内蒙古集宁制药厂生产，批号：20030409，实验时均以蒸馏水配制至所需浓度。
1.2 动物和试剂 Wistar大鼠48只，体重180~210g，雌雄各半，由浙江中医学院动物实验中心提供。丙氨酸氨基转换酶（ALT），天门冬氨酸氨基转换酶（AST），总蛋白（TP），白蛋白（ALB），均由英国Randox公司提供；III型前胶原（PCIII）放层粘蛋白（LN）、透明质酸（HA）放射免疫分析测定盒，均由上海海军医学研究所生物技术中心提供；CCL4（分析纯），苏州市第二化工厂研究所。
1.3 方法
1.3.1 分组、用药及模型复制方法：48只大鼠随机分为4组，分别为当飞利肝宁胶囊组，复方鳖甲软肝片组，模型组和正常组，每组12只。参照沈志云等[1]方法对前三组进行模型复制；第一天皮下注射40%CCL4花生油0.5ml/100g，以后每次0.3ml/100g，每周两次，各组在造模同时灌胃给药，每日一次。当飞利肝宁胶囊组：给当飞利肝宁胶囊每日1.5ml/100g，复方鳖甲软肝片组：给复方鳖甲软肝片每日1.5ml/100g(两组药量均相当于成人每日每公斤药量的10倍)，模型组与正常组每日按1.5ml/100g灌以蒸馏水，整个实验持续43天，各组分别在3周结束，6周结束时随机处死6只大鼠，分别取血及肝组织。
1.3.2 检测方法：大鼠摘眼球法取血，分离血清，ALT、AST、TP、ALB采用全自动生化分析仪检测。采用放免法检测血清透明质酸（HA），层粘连蛋白（LN），III型前胶原（PC-III）的含量。
1.3.3 肝脏组织病理学切片每次在肝左叶相同部位上取相同大小肝细胞固定于10%甲醛石蜡包埋切片，行HE及Masson’s染色，光镜观察。肝脏纤维化的分期（S），肝脏炎症程度的分级（G）均参照“1995年北京病毒性肝防治方案”中病理标准[2]，由同一病理科医师在相同环境中进行。
1.4 统计方法采用SPSS10.0统计软件进行分析。
2 结果
2.1 大鼠一般情况：正常对照组大鼠，在36天死亡一只。模型组第32天死亡一只，各组体重均持续增加。模型组动物较另外3组瘦弱，皮毛无光泽，倦怠，精神不振，激惹后烦躁易怒。
2.2 对大鼠AST、ALT、TP、ALB的影响（见表1）
多次给予CCL4花生油造成大鼠肝纤维化模型后，可引起大鼠ALT和AST升高，TP和ALB降低。实验结果显示，与模型组比较，6周时当飞利肝宁胶囊和复方鳖甲软肝片组均能不同程度降低大鼠ALT和AST，提高TP和ALB含量（P<0.01，P<0.05），当飞利肝宁组大鼠ALT和AST下降较复方鳖甲软肝片组明显，P<0.05；而两组TP和ALB含量比较，无明显差异，P>0.05。
表1 各组血清AST、ALT、TP、ALB水平比较（ ±S）
|
组别
|
n
|
ALT(U/L)
|
AST(U/L)
|
TP(g/l)
|
ALB(g/l)
|
|
正常组(第六周)
|
5
|
48.21±10.62
|
54.72±15.53
|
79.73±10.14
|
37.14±7.43
|
|
模型组(第六周)
|
5
|
458.04±110.35
|
330.05±98.81
|
57.01±14.63
|
27.04±4.91
|
|
当飞利肝宁组(第六周)
|
6
|
132.43±39.52★△
|
117.71±49.95★△
|
65.70±6.62#▲
|
33.52±3.81#▲
|
|
复方鳖甲软肝片组(第六周)
|
6
|
254.54±86.40★
|
202.80±70.20★
|
64.40±5.11▲
|
32.20±4.21▲
|
注：同模型组相比：★P<0.01，P<0.05；同复方鳖甲软肝片组比较：#P>0.05，△P<0.05
2.3 对大鼠血清HA、LN、PC-III的影响（见表2）
3周时与正常组、当飞利肝宁胶囊组和复方鳖甲软肝片组相比，模型组血清HA、PC-III升高，有统计学差异（P<0.01，P<0.05）；LN升高，但统计学上无差异（P>0.05）。6周时同正常组、当飞利肝宁胶囊组和复方鳖甲软肝片组相比，模型组HA、LN、PC-III升高，有统计学差异（P<0.001,P<0.01,P<0.05）。3周时和6周时当飞利肝宁组和复方鳖甲软肝片组相比，血清HA、LN、PC-III水平无显著差异（P>0.05）。
表2 各组血清HA、LN、PC-III含量变化的比较（ ±S）
|
组别
|
n
|
HA(ng/ml)
|
LN(ng/ml)
|
PC-III(ng/ml)
|
|
正常组(第三周)
|
6
|
167.97±73.65
|
17.37±5.87
|
15.23±8.31
|
|
模型组(第三周)
|
6
|
349.14±82.66
|
24.45±8.69
|
32.77±8.33
|
|
当飞利肝宁组(第三周)
|
6
|
196.83±78.32★▲
|
20.07±6.12#▲
|
16.35±7.18★▲
|
|
复方鳖甲软肝片组(第三周)
|
6
|
207.68±80.12★▲
|
22.47±7.52#▲
|
17.98±7.06★▲
|
|
正常组(第六周)
|
5
|
204.10±69.24
|
19.61±60.18
|
5.62±6.57
|
|
模型组(第六周)
|
5
|
537.17±195.04
|
39.95±14.23
|
36.22±15.09
|
|
当飞利肝宁组(第六周)
|
6
|
295.12±82.56★▲
|
21.29±7.10★▲
|
17.19±7.79★▲
|
|
复方鳖甲软肝片组(第六周)
|
6
|
304.35±76.62★▲
|
27.57±7.89★▲
|
21.19±8.45★▲
|
注：同复方鳖甲软肝片组比较：▲P>0.05；同模型组比较：★P<0.01，#P>0.05。
2.4 肝组织病理变化的影响（见表3）
正常对照组：肝细胞结构正常，未见在脂肪变、肿胀、纤维组织增生等明显的病理组织学的改变。模型对照组：大部分肝组织间质有不同程度的纤维组织增生，以汇管区为中心，随后延伸到小叶区，小叶结构紊乱，形成大小不等的假小叶，假小叶主要在汇管区与小叶中央区之间形成；肝组织间质含有多量脂肪细胞堆积，因大小不等的脂肪颗粒沉积使肿大的肝细胞压迫肝窦，肝窦变窄，纤维组织中间见有炎症细胞（主要是淋巴细胞、浆细胞及嗜酸性细胞）浸润，并有肉芽肿形成；肝细胞和汇管区的分界不清，同时伴有肝细胞碎片坏死。与模型对照组比较，当飞利肝宁胶囊组和复方鳖甲软肝片组大鼠肝组织病理损伤程度明显轻于模型对照组。
表3 各组肝纤维化程度及积分的比较
|
组别
|
n
|
S0
|
S1
|
S2
|
S3
|
S4
|
|
正常组(第三周)
|
6
|
6
|
0
|
0
|
0
|
0
|
|
模型组(第三周)
|
6
|
1
|
1
|
2
|
2
|
0
|
|
当飞利肝宁组(第三周)
|
6
|
5
|
1
|
0
|
0
|
0
|
|
复方鳖甲软肝片组(第三周)
|
6
|
4
|
2
|
0
|
0
|
0
|
|
正常组(第六周)
|
5
|
5
|
0
|
0
|
0
|
0
|
|
模型组(第六周)
|
5
|
0
|
0
|
0
|
2
|
3
|
|
当飞利肝宁组(第六周)
|
6
|
3
|
3
|
0
|
0
|
0
|
|
复方鳖甲软肝片组(第六周)
|
6
|
2
|
3
|
1
|
0
|
0
|
3 讨论
肝脏是机体重要代谢器官，当肝功能损伤时则代谢障碍，并影响其他脏功能，严重
者危及生命。肝纤维化是慢性肝病的病理基础，肝硬变则是各种肝病经久不愈的结局。因而，阻断肝纤维化的发生发展在肝病的治疗中有重大意义。祖国医学中无肝纤维化一词，根据其症状多属于中医“胁痛”，“积聚”等范畴，其病因病机为正气不足“湿热毒邪”“疫毒”等侵袭机体，留聚肝脏不散，阻滞气机，气滞血淤，脉络壅塞或聚湿成痰或血淤成积，病程长缠绵难愈。宛淑芳等人[3]认为“湿热疫毒”是肝纤维化的启动因素，结缔组织增生与变性是淤血的内容之一，因而本实验根据中医上述认识设立具有清热解毒，利胆化湿的当飞利肝宁胶囊组和具有扶正化淤的复方鳖甲软肝片组，干预CCL4所致大鼠肝纤维化形成，其结果表明：3周、6周，当飞利肝宁胶囊组，复方鳖甲软肝片肝功能指标和血清HA、LN、PC-III值明显低于模型组，有显著性差异(P<0.05)，结合3周、6周模型组组织病理变化的情况，肝细胞脂肪变性颗粒变性由轻变重，肝细胞坏死，胶原纤维由少到多，纤维隔离的形成，以及肝小叶结构的逐渐紊乱，说明当飞利肝宁胶囊组，复方瘪甲软肝片均对CCL4所致大鼠肝纤维化有干预作用并延缓了肝纤维化的形成。当飞利肝宁胶囊组的复方鳖甲软肝片组3周、6周血清HA、LN、PC-III值以及组织病理变化对比均无显著性差异（P>0.05）说明当飞利肝宁胶囊组在对大鼠肝纤维化的干预方面与复方鳖甲软肝片组具有同样的效果，治则用药不同而有同样的效果，其原因可能是在肝纤维化形成过程中二者进行了不同层次和方面的干预。但在肝功能的改善方面当飞利肝宁胶囊组优于复方鳖甲软肝片，提示其抗肝纤维化作用是通过抗肝损伤，保护肝细胞、促进肝功能恢复，抑制胶原纤维合成、促进其降解而发挥的。
参考文献
1 沈吉云，燕忠生，赵淑媛。软肝合剂对慢性实验性肝损伤的保护作用及机理。中华实用
中西医杂志。1999；12 （20）：1346
2 病毒性肝炎防治方案（试行）（1995年5月北京第五次全国传染病寄生虫病学术会议讨论
修订）。中华内科杂志。
3 宛淑方，张俊富。抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的临床研究。中西医结合肝病杂志，1999；9（4）：33
